RNX plus – EX6101

RNX plus is a Guanidine / phenol solution for total RNA isolation from homogenized sample. Through the action of
Guanidine salt in RNA isolation procedure, simultaneously DNA and protein are precipitated in phenol phase.Aqueous phase contains high quality and all types of the genomic RNA

در این کیت RNX plus با استفاده از نمک گوانیدیوم باعث رسوب همزمان DNA و پروتئین در فاز فنل می شود.  فاز رویی جداسازی شده و شامل RNA با کیفیت بالا می باشد.

محلول حاوی phenol / Guanidine برای استخراج RNA total از نمونه های مختلف می باشد.

• برداشت بافت

• نخستین مرحله از استخراج RNA است که طی آن بافت مورد نظر از میان مجموعه بافتی بدن جدا می‌شود که برای این منظور می‌توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت‌های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جدا کردن آنها ازتریپسین و EDTA استفاده می‌شود.

• همگن سازی

• در دومین گام باید RNA و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد. RNX-Plus یا Trizol در این مرحله مورد استفاده قرار می‌گیرند.

• جداسازی فازها

• در این مرحله RNA را از DNA و پروتئین‌های سلولی جدا می‌نمایند. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آنرا تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان سه فاز تفکیک شده را حاصل می‌نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین‌ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویین مربوط به RNA می‌باشد.

• رسوب سازی RNA

• در این مرحله پس از انتقال فاز رویین به لوله‌ای دیگر با استفاده ایزوپروپانول و سپس سانترفیوژ RNA را رسوب می‌دهیم.

• شستشوی RNA

• ششتشوی رسوب RNA با استفاده ازاتانول ۷۵٪ گام پنجم را تشکیل می‌دهد.
• نکته: در استخراج DNA شستشو با الکل ۷۰٪ انجام می‌شود ولی در استخراج RNA با الکل ۷۵٪

• محلول سازی RNA

• انحلال رسوب RNA با استفاده از DEPC treated Water ششمین گام از استخراج RNA می‌باشد

• تجزیه و تحلیل RNA

• آخرین گام سنجش صحت استخراج RNA می‌باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.