روش جداسازی سلولهای تک هسته ای خون محیطی

جهت استفاده از محصول دقیقا طبق پروتوکل زیر مراحل کار را انجام دهید.قبل از باز کردن محصول را به مدت یک الی دو دقيقه شیک کنید یا روی شیکر قرار بدید.
1- ابتدا حجم 5 میلی لیتر خون EDTA شده از هر نمونه را در فالكون تيوب 15میلی لیتری را با نسبت یک به یک (50%-50%) با 5 میلی لیتر PBS برای دریافت غلظت مناسب رقیق می کنیم . سپس دو تا سه بار فالكون را سرو ته می نمائیم.
2-مقدار 5 میلی لیتر محلول فايكول را در لوله مشابه دیگری ریخته و سپس بوسیله پیپت پاستور و پیپتور خون رقيق شده در مرحله قبل را به آهستگی و به شکلی که با محلول فايكول مخلوط نشود از کنار دیواره و به آرامی روی سطح فايكول می ریزیم. نكته: نباید خون رقیق شده با محلول فايكول تركيب شود و می بایست خون روی سطح فايكول قرار گیرد.
3- سپس فالكون را در سانتريفيوژ یخچال دار قرار داده با دمای 20 تا 18 درجه سانتیگراد و دور 2500 g و برای  15 الی 20 دقيقه سانتریفیوژ می کنیم تا لایه های مختلف براساس شيب چگالی جدا شوند. نكته: در صورتیکه از زمان خونگیری بیش از 2 ساعت گذشته باشد، می بایست مدت زمان سانتريفيوژ را افزایش داد.
4- پس از انجام سانتريفيوژ فالكون حاوی لایه های متمایز به ترتیب از بالا به پایین شامل : پلاسما (زردرنگ)، ( Buffy Coatحلقه شیری رنگ کدر)، فايكول ( شفاف) و گلبولهای قرمز (قرمز تیره )می باشد. بوسیله پیپت پلاستیکی یا سمپلر و با دقت کامل، حلقه شیری رنگ و کدر بین سرم و فايكول را جدا کرده و به لوله ای دیگر منتقل می کنیم. نكته: حلقه شیری رنگ کدر Buffy Coat حاوی سول های PBMC می باشد.
5- به نمونه Buffy Coat جدا شدہ تا حجم 10 ميلي ليتر ، PBSاضافه می کنیم
6-فالكون حاوی Buffy Coat وPBS را در دمای 4 تا 6 درجه سانتیگراد برای مدت 5 دقیقه و با دور 1400 rpm در سانتريفيوژ یخچال دار سانتریفیوژ می کنیم (مرحله شستشو)
7-مرحله شستشوی فوق را بار دیگر تکرار می كنيم.
8-سلولهای ته نشین شده را جداسازی کرده و برای انجام مراحل بعد به میکروتیوب های1/5میلی لیتری منتقل مي نماييم.